干货分享 | THP-1细胞培养建议-昊鑫生物
7755 人阅读发布时间:2023-11-24 14:47
干货分享 | THP-1细胞培养建议-昊鑫生物
THP-1细胞系是1980年建立的人单核细胞白血病细胞系,从一位患有急性单核细胞白血病的小男孩外周血中分离得到,有分化多种巨噬细胞的能力,被广泛应用于单核细胞和巨噬细胞的相关机制、免疫和炎症信号通路等研究。
细胞培养注意事项
1、该细胞冻存后复苏率较低,冻存时请酌情提高细胞量,冻存时活细胞密度不能低于4×106mL,细胞复苏后需要培养5-10天后状态才能恢复,前一周不要进行离心操作。
2、该细胞对细胞密度较为敏感,培养、传代时请注意控制细胞密度。
3、频繁的细胞计数是监测THP-1细胞状态的最佳方法。
4、当细胞密度达到8×105个活细胞/ mL时需要进行传代。细胞密度不要超过1×106活细胞/ mL。
5、该细胞为悬浮细胞,在培养时更喜欢温和处理,培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换,传代时使用半换液法对细胞状态较为有利,因此我库建议您使用半换液法进行传代。
6、THP-1细胞中需要添加β-巯基乙醇,现用现配,不可直接添加至完培中长期储存,会影响β-巯基乙醇的稳定性。
- 细胞传代后细胞内出现黑色小点,细胞间隙内出现少量颗粒物或者培养基中浮游着少量死细胞等均为正常现象,对细胞的增殖及试验无影响,不建议频繁离心,最多一周一次。
培养体系
RPMI-1640培养基(BC-M-017)+20%特级胎牛血清(BC-SE-FBS01)+1%青霉素-链霉素溶液(BC-CE-007)+0.05mMβ-巯基乙醇
Q&A
Q:什么是半换液法?
A:以T25瓶为例,将培养瓶站立静置5-10min,肉眼可见细胞沉底,吸2.5mL上清至离心管离心,新鲜培养基重悬后打回原瓶,在原瓶中补充新鲜培养基至5mL。
Tips:THP-1培养时,培养基一定要给充足
Q:细胞贴壁了怎么办?
A:THP-1培养时有少量贴壁是正常现象,建议在传代时只吸取上清换瓶培养。或者可以使用不贴壁的无菌培养瓶培养。
Q:细胞聚团了怎么办?
A:少量聚团属于正常现象,但较多聚团需要注意,检查培养箱是否正常、培养体系酸碱性以及血清是否合适,适当更换血清。