【基质胶应用一】HUVEC 血管形成实验
一.实验材料
细胞:HUVEC
培养基:ECM 完全培养基、DMEM 培养基
耗材:预冷枪头、预冷 96 孔板和预冷 1.5mL 离心管
其他:胰酶,PBS,Matrigengel(ABW 货号:082704,金牌基质胶)
二. 实验步骤
A. 准备基质胶
1.实验前一天将 Matrigengel 置于冰盒中,放入 4℃冰箱,使胶能过夜缓慢融化。(注意:同样要准备一些 4℃预冷的枪头用于吸取 Matrigengel)
2.开始实验前,将 Matrigengel 始终保持放在冰盒中。
3.冰上操作。Matrigengel 用预冷枪头混匀。
B. 铺基质胶
由于每一批 ABW® Matrigengel 基底膜基质浓度会有差异,建议使用前做 1:1 及 2:1 的稀释,操作如下:
1.提前将 96 孔板和枪头预冷,准备两个预冷 1.5mL 离心管用于稀释 Matrigengel。按照想要的比例,稀释完 Matrigengel 后,于每孔中加入 50µL Matrigengel,避免产生气泡。在 37℃培养箱中放置 45min-1h。(注意枪头要垂直于内孔的正上方加入 Matrigengel,防止有 Matrigengel 流经孔壁而留下残留胶。若是孔的底部没有铺满胶,可以晃动一下96 孔板,使底部铺胶均匀)
例如:铺原胶、稀释 1 倍、稀释 0.5 倍时,用 DMEM 稀释
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ABW® Matrigengel 基 底 膜 基质
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原胶
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50µL 原胶
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1:1
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25µL 原胶+25µL DMEM
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1:2
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33.3µL 原胶+16.7µL DMEM
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C. 铺细胞
1.当 HUVEC 细胞长满70~80%时,消化下来,并用含 10%FBS 的 DMEM 重悬,计数,使每孔加入 50µL 重悬液,浓度为 30000 个细胞/孔,重复三孔。(注意保持枪头垂直在孔的上方,不要接触到下面的凝胶。)
2.37℃培养箱孵育,四小时后可见血管形成。
D. 采集图像