基质胶实操指南③：侵袭、成瘤与干细胞培养关键操作解析

建议不要重复使用，可能会影响实验结果。

按照基质胶（082704/082706无酚红）：基础培养基=1：8比例稀释使用，当基质胶被稀释到小于3mg/mL时，无法清晰地观察到凝胶现象，只要在37°C环境进行孵育，基质胶会在底层形成薄层凝胶。

1. 首先明确细胞是否具备侵袭能力和细胞状态。建议实验前用酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMPs)的表达，特别是MMP-2的表达。为了让实验结果更明显，可在无血清的情况下，让细胞饥饿12-24h，再进行实验。

2. 很可能是上室混有高浓度血清或者是小室孔径不对，建议核对小室的孔径；

3. 确认基质胶的稀释比例：基质胶太厚或浓度过高导致阻力过大，细胞无法有效降解或穿透；建议标准型基质胶按照1：8比例稀释后使用。

出现这种情况，通常是因为铺板所用的培养板温度过高，或者培养板温度分布不均匀。当基质胶加入时，部分局部区域迅速凝固，而有些区域尚未凝固。在后续摇晃培养板的过程中，就容易产生丝状结构以及黑色点状物质。

解决方案：建议将六孔板放置在 -20°C 的环境中过夜预冷，之后再取出进行铺板操作。

• 取36 mL冷藏DMEM/F12或者Rhoi Free铺板液于50 mL离心管中，准备4个6孔板于-20度预冷过夜，标记基质胶、批号、日期和操作人。1 mL无菌枪头置于-20℃冰箱中预冷1小时，取出一支冷冻的基质胶(400 μL)置于碎冰中，再放入4℃冰箱解冻至完全化冻。准备一个装满碎冰的冰盒,将解冻过的基质胶、预冷的1mL枪头放置于生物安全柜上。

• 用预冷枪头将解冻过的基质胶(400 μL)加入冷的DMEM/F12并反复吹打解冻混匀。吸出已解冻混匀的基质胶加入离心管中，剩余的DMEM/F12使用10 mL移液管再次反复吹打混匀。分装1.5 mL/孔于4个六孔板中，轻轻摇晃混匀。培养板置于37°凝胶1小时后即可使用，或置于4℃冷藏过夜，两周内使用。