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    浙江 杭州市 上城区

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    细胞库 / 细胞培养、试剂、原辅料包材、实验室仪器 / 设备、技术服务、耗材

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技术资料/正文

【基质胶应用】PDO 类器官形成实验

45 人阅读发布时间:2025-12-10 11:01

一.类器官 Organoid

基质胶是从富含胞外基质蛋白的小鼠肿瘤细胞中提取出基底膜基质,其主要成分有层粘连蛋白、IV 型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。
 
在室温条件下,Matrigengel 聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达等的研究。
技术资料图片1
(配图:5 倍镜管擦拍照)
类器官是一个在 Matrigengel 的支撑下形成三维 “微器官模型”,可以模拟天然器官的结构和功能。与传统的二维培养模型相比,类器官可以模拟出整个生物体的生理过程,具有更接近体内细胞组成和行为,基因组更稳定,更适合生物转染和高通量筛选的优点。与动物模型相比,类器官模型的操作不仅更简单,而且快速成型,两到三周即可得到所需数据。

二.实验材料

  • 细胞:病人肿瘤细胞
  • 培养基:F12K/DMEM 培养基,PDO 培养基
  • 耗材:预冷枪头、预热 24 孔板、预冷 0.5ml 离心管
  • 其它:Matrigengel(ABW 货号 0827035)

三.实验步骤

A. 实验准备
  1. 提前 24h 将 Matrigengel 放置于 4° 冰箱慢慢融化,(为避免反复冻融,收到货以后分装成小规格保存,于 - 20° 保存)
  2. 需要提前制冰。
B. 细胞获取:
从医院将病人的肿瘤组织,快速按照获取原代细胞的方法操作,获得肿瘤细胞。
C. 细胞种板:
  1. 按每孔 5000 个细胞稀释,将细胞悬液放置在冰上,按照比例加入 Matrigengel,混合均匀,将混合液滴入 10ul-20ul 到 24 孔板底部,每孔约 3-4 滴。
 
稀释比例 Matrigengel F12K/DMEM 培养基
2:1 100ul 原胶 50ul F12K/DMEM (含细胞)
1:1 75ul 原胶 75ul F12K/DMEM (含细胞)
1:2 50ul 原胶 100ul F12K/DMEM (含细胞)
 
  1. 将培养板放入 37° 培养箱中,孵育 30min,待 Matrigengel 凝固。
  2. 准备所需量 PDO 培养基,放入 37° 水浴锅预热。
  3. 胶滴凝固以后,每孔加入 500ul 培养基。
  4. 将培养板放会培养箱中继续培养。
  5. 每隔两天采集图像记录。
  D. 采集图像

技术资料图片2

(配图:图 1:第一天细胞形态;图 2:第四天细胞形态)
资料格式:

微信图片_20251210105428_76_7.jpg

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